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生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。

巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在412nm处有最大吸收峰。

• 组织样本：按照组织质量(g)∶水体积(mL)＝1∶5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL蒸馏水）进行冰浴匀浆，然后8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
  
• 血清、培养液样本：稀释5倍后测定，可取0.1mL样本，加入0.4mL蒸馏水，混匀，置冰上待测。

• 分光光度计预热30min，调节波长至412nm，双蒸水调零。
  
• 在1mL玻璃比色皿中加入如下试剂：
  

  成分(μL)	对照管	测定管
  样品	200	200
  试剂一	750	750
  试剂二		50
  乙醇	50

  
  
• 混匀，25℃静置10min，测定412nm吸光值，ΔA＝A_测定－A_对照。每个测定管设一个对照管。

• 组织样本：
  
  • 按样本重量计算：
    
    总巯基含量(μmol/g鲜重)＝(ΔA＋0.0037)÷3.6222×V_样总÷W＝0.276×(ΔA＋0.0037)÷W
    
    
  • 按样本蛋白浓度计算：
    
    总巯基含量(μmol/mg prot)＝(ΔA＋0.0037)÷3.6222×V_样总÷Cpr＝0.276×(ΔA＋0.0037)÷Cpr
• 血清、培养液样本：
  
  总巯基含量(μmol/L)＝(ΔA＋0.0037)÷3.6222×5×10³＝1380×(ΔA＋0.0037)

• V_样总：加入提取液体积，1mL；
  
• W：样品质量，g；
  
• Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
  
• 5：血清，培养液等液体样本稀释倍数；
  
• 10³：1mmol/L=10³μmol/L。